Caracterización de la proteína VDAC del intestino De la garrapata RHIPICEPHALUS MICROPLUS y su Función en la interacción con BABESIA BIGEMINA

Abstract

"Resumen Rhipicephalus microplus es el vector más estudiado en la investigación veterinaria, debido a que transmite diferentes patógenos al ganado, como es el caso de los parásitos del género Babesia, causantes de la babesiosis bovina. El estudio de los mecanismos moleculares en la interacción Rhipicephalus-Babesia, es crucial para implementar estrategias que ayuden a controlar la enfermedad. Actualmente, los avances en la investigación sobre esta interacción han permitido proponer diversos candidatos a vacunas bloqueadoras de la transmisión del patógeno y/o de control del vector. En este escenario, identificamos previamente a la porina mitocondrial VDAC en las células intestinales de garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus (BmVDAC) que interacciona con las fases sexuales de Babesia, esta proteína al parecer tiene una participación relevante al momento de la infección de la garrapata vector con el parásito. En el presente trabajo se caracterizó a la proteína BmVDAC en respuesta a la infección con Babesia bigemina, para lo cual fue analizado el nivel de expresión del transcrito Bmvdac en respuesta a la infección con Babesia mediante ensayos de RT-PCR, los resultados demuestran que el gen Bmvdac aumenta significativamente (p<0.0001) su nivel de expresión en garrapatas infectadas con respecto a las no infectadas, sustancialmente a las 24 horas post-repleción. Adicionalmente, una secuencia parcial de la proteína BmVDAC fue clonada y expresada, para producir anticuerpos anti-BmVDAC, los cuales se utilizaron para inmunolocalizar y determinar el nivel de expresión de la proteína en tejido intestinal de la garrapata mediante ensayos de Western Blot e inmunofluorescencia. Los resultados mostraron una expresión diferencial significativa y redistribución de la proteína BmVDAC entre células infectadas y no infectadas especialmente a las 24 hrs post-replecion. Estos resultados en conjunto corroboran lo observado en el análisis por RT-PCR, sugiriendo que esta modificación está dada como una reacción de las células intestinales del vector frente a la infección inicial con Babesia, como se ha reportado en otros organismos. Conjuntamente, la participación de la proteína BmVDAC en el proceso de infección fue evaluada mediante un ensayo de bloqueo con anticuerpos, mediante la alimentación artificial de garrapatas. Los resultados obtenidos en esta investigación siguieren que la proteína BmVDAC es importante en el proceso de infección de Babesia bigemina al intestino de su vector; sin embargo, es necesario determinar con ensayos funcionales si esta proteína podría ser un candidato vacunal en el bloqueo de la transmisión de Babesia y control del vector".