“Análisis de la presencia de micobacterias en estado latente en muestras de tejido pulmonar y extrapulmonar de humano y ratón”

Abstract

Resumen. "Antecedentes: Un tercio de la población mundial tiene infección latente por Mycobacterium tuberculosis, una característica importante de esta condición, es la reactivación, ya que del 10-15% de estos casos ocurren en sitios extrapulmonares sin rastros de enfermedad pulmonar activa. Métodos: Para establecer la frecuencia y localización del ADN micobacteriano, se estudiaron los órganos (pulmón, hígado, bazo y riñón) de 49 individuos que murieron por causas ajenas a la tuberculosis (PCR/hibridación, PCR in situ, PCR en Tiempo Real y espoligotipificacion). Resultados: Los resultados obtenidos fueron similares, el pulmón (36), el bazo (35), riñón (34) e hígado (33). Utilizando PCR in situ se localizó ADN micobacteriano en endotelio pulmonar, neumocitos y macrófagos; en el riñón se detectó en las células parietales de la capsula de Bowman y los túbulos proximales. En bazo, los macrófagos y las células endoteliales de los sinusoides mostraron positividad; en el hígado la positividad fue frecuente en células de Kupffer y en el endotelio de los sinusoides. Se lograron obtener 54 espoligotipos en las muestras de 30 sujetos de los cuales 43 genotipos fueron diferentes, incluyendo 36 tipos “huérfanos”. Para confirmar la viabilidad de la micobacteria, se seleccionaron 10 muestras de tejidos positivos para aislar el ARN micobacteriano. En todas las muestras se evidenció la expresión de ARNr 16S, mientras que la expresión de icl y acr solo se observó en 8 y 4 muestras respectivamente. Conclusiones. M. tuberculosis persiste en diversos sitios y tipos celulares, los cuales pueden constituir reservorios que pueden reactivarse y producir tuberculosis pulmonar y/o extrapulmonar, esta ultima aun sin enfermedad pulmonar activa. Abstract. Background: A third of the world’s population has latent infection with Mycobacterium tuberculosis, one important characteristic of this condition is the reactivation, 10-15% of the reactivating cases occur at extrapulmonary sites without active pulmonary tuberculosis. Methods: To establish the frequency and location of mycobacterial DNA, in individuals who died from causes other than tuberculosis were analyzed (PCR/hybridization, in situ PCR, real time PCR and spoligotyping). Results: The results were similar, lung (36), spleen (35), kidney (34) and liver (33). By in-situ PCR mycobacterial DNA was found in lung endothelium, pneumocytes and macrophages; in kidney in Bowman’s parietal cells and convoluted proximal tubules. In spleen, macrophages and sinusoidal endothelial cells showed positivity; in liver it was frequent in Kupffer cells and sinusoidal endothelium. Spoligotyping from 54 pulmonary and extrapulmonary positive tissues from 30 subjects showed 43 different genotypes, including 36 orphan types. To confirm the viability of mycobacteria, 10 positive tissue samples were selected to isolate mycobacterial RNA. All the samples showed 16S rRNA expression, while 8 and 4 samples respectively show expression of the latent infection genes isocitrate lyase and -crystallin. Conclusions: M. tuberculosis persists in several sites and cell types which might constitute reservoirs that can reactivate producing extrapulmonary tuberculosis without lung involvement".