Estandarización de las condiciones de detección de MCP- 1 mediante aptámeros de ADN

Abstract

Este trabajo describe la selección y caracterización in silico e in vitro de dos nuevos aptámeros de ADN, M146_47 y M57_32, dirigidos a la proteína quimioatrayente de leucocitos 1 (MCP-1). La optimización se basó en el análisis de aptámeros previos (M146, M57, M8), los cuales presentaban reacciones cruzadas con albúmina humana (HSA). La mutación aleatoria in silico y las predicciones de afinidad con MCP-1 y HSA permitieron proponer estos candidatos mejorados, sin interacción predicha con HSA.

Los experimentos de acoplamiento molecular confirmaron la interacción de M146_47 y M57_32 con MCP-1. Se estandarizó la PCR asimétrica para su síntesis. La determinación experimental por ELISA y PCR cuantitativo reveló una Kd aparente de 226.6 pM para M146_47 y 103 pM para M57_32. M146_47 mostró un límite de detección de 25 pg de MCP-1 sin reacción cruzada con HSA, sugiriéndolo como un buen candidato para la detección de proteínas in vitro.